关键词:
猪膏发煎
黄疸
纳米技术
纳米类成分
肝脏保护作用
脑保护作用
摘要:
背景:猪膏发煎治疗黄疸病的记载首见于《伤寒杂病论》,已沿用千年,尤其是在清代,猪膏发煎的应用记载及理论论述均很丰富。但在现代临床中,猪膏发煎在黄疸病的治疗中却鲜有应用,其药理作用和物质基础更是没有现代研究涉及。形成这样极大反差的主要原因是对猪膏发煎疗效的质疑,从而限制了其临床应用。然而,通过系统整理文献发现,猪膏发煎存在一系列值得研究的科学问题,猪膏发煎由猪油和人发煅烧而成,属于中药炭药的一种,若从药物合成的角度分析,猪膏发煎更是我国古代首次进行药物化学合成的重大创举。所以,猪膏发煎有其重要的研究价值。炭类中药(简称炭药)具有悠久的历史和丰富的临床积累,其确切的疗效得到了临床应用和现代药理学研究的双重肯定。但炭药发挥作用的关键物质基础至今仍未被揭示,现行的《中国药典》也缺乏对炭药质量标准的记载。现有的研究结论无法合理的阐释炭药的物质基础,经典的对于中药物质基础的研究模式,可能并不适用于炭药的研究,也不适用于研究猪膏发煎治疗“诸黄”的机理。我们的前期研究结果表明,高温炭化的过程是研究炭药的关键切入点。通过借鉴纳米科学的理念和技术方法,对在炭化过程中得到的有效成分进行分析,发现这类成分是中药物质基础中至今未被认识到的一类新成分,根据这类有效成分的结构特征和多种药理作用,我们将此类物质命名为“纳米类成分”(Nano-components,NCs)。目的:以文献记载为基础,复现并优化猪膏发煎的制备工艺。以药理药效为指导,证实猪膏发煎治疗“诸黄”的作用,并筛选出最佳的制备条件。借鉴纳米科学的技术方法,发现并表征“猪膏发煎纳米类成分”(Pork lard and human hair decoction nano-components,LHD-NCs),分析其特性与其生物活性之间的关联性。进一步利用三种动物模型,研究LHD-NCs治疗“诸黄”的作用及机制,对经典原文进行深度解析,诠释其科学内涵。方法:1.通过现代的科学技术,在实验室中复现猪膏发煎的制备工艺,结合文献记载,初步筛选相对合理的猪膏发煎的制备条件,为后续的研究提供基础。2.以药理药效为指导,通过α-异硫氰酸萘酯(α-Naphthylisothiocyanate,ANIT)诱导的小鼠肝内胆汁淤积性黄疸模型,以及四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCL)诱导的急性肝损伤模型,评价不同条件制备的猪膏发煎的药效,筛选出最佳的制备条件。3.使用萃取的方法对猪膏发煎进行分离,并评价猪膏发煎与分离获取的水溶性成分(WSC)与油溶性成分(OSC)的药效,进一步优化猪膏发煎的制备工艺。4.借鉴纳米科学技术的方法,并结合本团队前期研究结果研究LHD-NCs,并建立相对规范且可重复的LHD-NCs的制备方法。按照优化后的制备工艺,制备300℃1h、300℃2h、350℃0.5h和350℃1h四个不同条件的LHD-NCs,并对他们从形态学特征、光学特性、结构特性等方面进行详细的表征。5.通过动物实验和细胞毒性实验评价LHD-NCs的安全性,获取LHD-NCs的安全性参数。6.研究LHD-NCs对ANIT诱导的黄疸模型的作用和机制。包括对血清胆红素含量等血清生化指标的影响,对尿胆红素含量的影响,对血清TNF-α、IL-1β和IL-6等细胞因子水平的影响,对肝组织匀浆的超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的影响,以及相应的肝组织病理特征与肝组织超微结构特征。进一步研究LHD-NCs对CCL诱导的急性肝损伤模型的影响,评价LHD-NCs的肝脏保护作用并研究其机制。7.探索并建立高胆红素血症模型,分析LHD-NCs在高胆红素血症模型中,对血清胆红素和尿胆红素含量影响的时效关系,分析相应的肝脏病理特征及海马区病理特征,评价LHD-NCs在高胆红素血症模型中的肝脏保护作用和脑保护作用。进一步评价LHD-NCs降低胆红素的作用与机制。结果:1.本研究通过现代的科学技术,在实验室中复现了猪膏发煎的制备工艺,结合“发消药成”及“存性”为标准,明确了制备猪膏发煎的反应温度和反应时间,建立了稳定且可重复的制备工艺。发现300℃1h、300℃2h、350℃30min和350℃1h为较合理的制备条件。且在上述制备条件下,猪膏发煎的产率相对稳定,约在75%至80%之间。2.通过比较猪膏发煎与分离获取的水溶性成分(WSC)和油溶性成分(OSC),对CCL模型小鼠血清转氨酶水平及血脂含量的影响,发现相比于猪膏发煎和油溶性成分,水溶性成分不仅药效更好,而且不会影响血脂代谢。3.通过TEM观察猪膏发煎水溶性成分,发现其中可见丰富的、分散度较好的近球形颗粒,直径在1-6 nm之间的,平均直径为3.47±1.09 nm。根据本团队的前期研究结果