关键词:
脑出血
血必净注射液
小胶质细胞
焦亡
细胞实验
动物实验
摘要:
目的探讨血必净注射液对脑出血后小胶质细胞焦亡的影响。方法(1)细胞实验。采用12.5 mL/L、25 mL/L、50 mL/L血必净注射液处理小鼠BV2小胶质细胞24 h,观察血必净注射液对细胞存活率的影响。将BV2小胶质细胞随机分为对照组、模型组、血必净组,模型组、血必净组采用氧合血红蛋白与尼日利亚霉素(Nigericin)共同刺激法构建脑出血后小胶质细胞焦亡模型,其中血必净组在制模前1 h给予50 mL/L血必净注射液预处理,对照组、模型组给予完全培养基处理。建模24 h后,在光镜下观察细胞形态学改变;采用逆转录PCR检测各组细胞焦亡相关分子NLR家族pyrin结构域3因子(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1 mRNA表达水平;采用ELISA检测细胞上清液肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-18、IL-1β水平。(2)动物实验。将54只大鼠随机分为对照组、脑出血组、血必净组,每组18只。脑出血组和血必净组采用胶原酶溶解液注射法构建脑出血模型,其中血必净组在造模前1 h给予血必净注射液10 mL/kg预处理,对照组和脑出血给予等体积生理盐水处理。建模24 h后,采用改良Garcia评分评估大鼠神经功能损伤程度,采用脑干/湿质量比值法评估脑水肿程度;采用免疫组化、免疫荧光染色观察大鼠脑组织NLRP3、gasdermin D蛋白N端(GSDMD-N)表达情况;采用Western blot检测大鼠脑组织NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平。结果(1)细胞实验。不同浓度血必净注射液对BV2小胶质细胞的存活率没有显著影响,因此后续实验选择临床常用的高浓度(50 mL/L)血必净注射液进行干预。与对照组相比,模型组乳酸脱氢酶活性增加;与模型组比较,血必净组乳酸脱氢酶活性降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达水平及TNF-α、IL-18、IL-1β表达水平升高;与模型组比较,血必净组NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA表达水平及TNF-α、IL-18、IL-1β表达水平降低(P<0.05)。(2)动物实验。与对照组相比,脑出血组大鼠的脑组织水含量升高,改良Garcia评分降低,脑组织NLRP3阳性染色及GSDMD-N与小胶质细胞共定位荧光强度增加,NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平升高;与脑出血组比较,血必净组大鼠的脑组织水含量降低,改良Garcia评分升高,脑组织NLRP3阳性染色及GSDMD-N与小胶质细胞共定位荧光强度减少,NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论血必净注射液可减轻小鼠/大鼠脑出血后小胶质细胞焦亡及神经功能损伤,其机制可能与通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD-N信号通路介导的小胶质细胞焦亡,减少促炎因子释放,减轻脑出血后神经炎症反应有关。